SIRT7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401401-ACT

SIRT7はサーチュインファミリーに属する核内のNAD+依存性デアシラーゼであり、クロマチン構造、リボソームDNA（rDNA）転写、ならびにRNAポリメラーゼIによるリボソーム生合成を制御します。SIRT7はヒストンおよび非ヒストン基質を調節することで、エピジェネティック制御を細胞ストレス応答、代謝恒常性、そしてDNA損傷応答や複製ストレス経路を含むゲノム完全性の維持と結び付けます。SIRT7活性の変化は、増殖制御の破綻、プロテオスタシス、ミトコンドリア機能異常と関連付けられており、がん遺伝子シグナル伝達、加齢関連表現型、炎症性または代謝性の機能不全の研究において重要です。そのためヒトSIRT7は、核小体機能と細胞周期制御およびストレス適応を結び付ける転写プログラムを解析するための結節点として広く用いられています。

SIRT7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIRT7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SIRT7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIRT7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIRT7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SIRT7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIRT7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSIRT7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIRT7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSIRT7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。