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Sigma Receptor双切口酶质粒(m) | sc-422068-NIC | 20 µg | $410.00 |
Sigmar1 编码 σ 受体 1(SIGMAR1),这是一种位于内质网膜上的分子伴侣蛋白,富集于线粒体相关内质网膜(MAM)区域,可调控 Ca2+ 交换、内质网应激信号传导以及蛋白质稳态(proteostasis)。在小鼠细胞中,SIGMAR1 通过与依赖 IP3R 的钙离子通量以及适应性的未折叠蛋白反应(UPR)通路相耦联,从而影响线粒体生物能量学和氧化应激反应。该蛋白还参与脂质代谢与转运,塑造膜微区的组织以及受体信号传导。文献报道 SIGMAR1 活性失调与神经退行性病变、神经病理性疼痛和代谢应激表型相关,因此它是开展细胞稳态机制研究的一个有用节点。
Sigma Receptor 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Sigmar1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Sigmar1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Sigmar1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Sigmar1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。