Shc CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400914-ACT

SHC1 kodiert das Shc-Adapterprotein, einen zentralen Signaltransduktor, der aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen und Zytokinrezeptoren mit nachgeschalteten Kaskaden wie RAS–MAPK/ERK und PI3K–AKT verbindet. Über seine PTB- und SH2-Domänen koordiniert Shc die phosphorylierungsabhängige Zusammenlagerung von Signalkomplexen, die Proliferation, Differenzierung, Überleben und zelluläre Stressantworten regulieren. Die SHC1-abhängige Signalübertragung ist zudem mit Insulin-/IGF-Signalwegen verknüpft und beeinflusst mitochondriale sowie oxidative Stresssignalgebung, was zu kontextabhängigen Veränderungen von Zellwachstum und Apoptose beiträgt. Eine Dysregulation der SHC1-/Shc-Signalgebung wurde mit aberranter Aktivität von Wachstumsfaktor-Signalwegen in der Krebsbiologie sowie mit veränderten Signaldynamiken in Forschungsmodellen zu Stoffwechsel- und neurodegenerationsbezogenen Fragestellungen in Verbindung gebracht.

Shc Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SHC1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Shc Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SHC1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SHC1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Shc-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SHC1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Shc-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Shc-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SHC1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.