SERCA3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402840-NIC

ATP2A3 codifica la Ca2+-ATPasi del reticolo sarco/endoplasmatico umano SERCA3, un’ATPasi di tipo P che pompa il Ca2+ citosolico nel lume del RE per ripristinare i livelli basali di calcio dopo eventi di segnalazione. Controllando le riserve di Ca2+ del RE e i transitori di Ca2+ nel citosol, SERCA3 contribuisce a modulare vie calcio-dipendenti, tra cui l’ingresso di calcio operato dallo svuotamento delle riserve (store-operated calcium entry), il ripiegamento proteico e il controllo qualità all’interno del RE, e l’accoppiamento stimolo-secrezione in tipi cellulari specializzati. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di ATP2A3/SERCA3 sono state associate a una disregolazione dell’omeostasi del calcio, a risposte di stress del RE e a cambiamenti nei programmi di differenziamento, con rilevanza per studi sulla segnalazione delle cellule immunitarie e sulla biologia epiteliale. Queste funzioni rendono ATP2A3 un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di gestione del calcio che influenzano proliferazione, apoptosi e segnalazione infiammatoria, senza implicare esiti clinici.

SERCA3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP2A3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP2A3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP2A3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP2A3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.