Septin 4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402288-ACT

O gene humano **SEPT4** codifica a septina 4, uma proteína de suporte do citoesqueleto que se liga a GTP e se monta em filamentos hetero-oligoméricos e estruturas em forma de anel para organizar domínios de membrana. A septina 4 contribui para a citocinese, a maturação do corpo médio, o tráfego de vesículas e o estabelecimento de barreiras de difusão ao coordenar-se com a actina, os microtúbulos e reguladores associados da polaridade celular. Por meio dessas funções, o **SEPT4** ajuda a controlar a fidelidade da divisão celular e programas de remodelação do citoesqueleto que influenciam a homeostase neuronal e epitelial. A organização desregulada das septinas ou a expressão de **SEPT4** tem sido associada na literatura a processos neurodegenerativos, alterações na sinalização de apoptose e mudanças ligadas ao câncer na proliferação e migração, apoiando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre citoesqueleto e ciclo celular.

Septin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SEPT4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Septin 4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SEPT4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SEPT4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Septin 4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SEPT4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Septin 4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Septin 4 em células tumorais com expressão de SEPT4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.