SENP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417768-ACT

A SENP1 (protease 1 específica de sentrina) humana é uma protease de SUMO que remove modificações por SUMO de proteínas-alvo, regulando assim o controle, dependente de SUMOilação, da estabilidade proteica, da localização e da atividade transcricional. Por meio de uma deSUMOilação dinâmica, a SENP1 influencia a sinalização núcleo–citoplasma, a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA e programas transcricionais adaptativos ao estresse, incluindo vias ligadas à hipóxia e à regulação metabólica. Alterações na atividade da SENP1 têm sido associadas à sinalização desregulada de fatores de transcrição, proliferação aberrante e mudanças na proteostase, tópicos frequentemente explorados na biologia do câncer e em outras condições caracterizadas por homeostase perturbada da via de SUMO.

SENP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SENP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SENP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SENP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SENP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SENP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SENP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SENP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SENP1 em células tumorais com expressão de SENP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.