SEMA5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422885

概要

Sema5aは、膜貫通型のガイダンス因子SEMA5Aをコードしている。SEMA5Aはセマフォリンファミリーの一員で、細胞骨格を再編成する受容体介在性シグナル伝達を通じて、軸索の経路選択、神経細胞の移動、シナプス形成を制御する。神経系での役割に加え、SEMA5Aは複数の組織における細胞接着および運動性のプログラムにも関与し、方向性運動や組織パターニングを形作る経路と交差する。SEMA5Aの発現やシグナル伝達の変化は神経発達関連の表現型と関連づけられており、異常な結合性や炎症性微小環境を伴う状況で研究されている。マウスモデルでは、Sema5aの撹乱を用いて回路形成の機構を解明し、発生および疾患関連プロセスにおけるガイダンスシグナルと細胞状態の変化を結び付けて検討する。

SEMA5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSema5a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sema5a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sema5aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA5Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA5Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sema5a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA5Aの機能に不可欠なSema5aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sema5aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEMA5A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sema5a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA5A HDRプラスミド（m）および SEMA5A HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSema5aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSema5a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。