SEMA3C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402489-ACT

SEMA3Cは、分泌型のガイダンス因子であるセマフォリン3Cをコードしており、ニューロピリンおよびプレキシン受容体を介してシグナルを伝達し、細胞骨格ダイナミクス、方向性移動、細胞間相互作用を制御します。軸索誘導にとどまらず、SEMA3CはRhoファミリーGTPアーゼ、接着斑（フォーカルアドヒージョン）のターンオーバー、インテグリン依存的接着と交差する経路を調節することで、血管パターニングや組織リモデリングにも寄与します。SEMA3Cの発現異常は、異常な血管新生シグナル、侵襲的な細胞挙動、ストローマ‐腫瘍間コミュニケーションの変化といった文脈で報告されており、発生および疾患関連の微小環境のメカニズム研究において重要です。その活性は、上皮細胞および内皮細胞の可塑性、細胞外マトリックスの構築、受容体介在性セマフォリンシグナル伝達のモデルで一般的に解析されています。

SEMA3C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEMA3Cの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SEMA3C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEMA3C 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEMA3C転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SEMA3Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEMA3C遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSEMA3C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEMA3C発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSEMA3C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。