Seipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406865

概要

BSCL2はセイピンをコードしており、セイピンは小胞体（ER）膜に存在するタンパク質で、脂肪滴の生合成を組織化し、ER–脂肪滴間の接触を調整することでトリアシルグリセロールの貯蔵を制御します。セイピンは、リン脂質リモデリング、中性脂質のパッケージング、ならびにERプロテオスタシスへの作用を通じて脂肪細胞分化と脂質恒常性を支え、脂質代謝とオルガネラ形態を結び付けています。BSCL2の機能破綻は脂肪滴の大きさや分布を乱し、ERストレス応答を引き起こし得るため、細胞のエネルギーバランス研究における中核的な要所とされています。BSCL2の遺伝的変異は先天性全身性脂肪萎縮症およびセイピノパチー・スペクトラムの神経変性表現型と関連しており、脂質取り扱いの変化を介して、脂肪組織の機能障害と神経細胞の脆弱性を結び付けています。

Seipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるBSCL2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、BSCL2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、BSCL2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Seipinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Seipinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、BSCL2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Seipinの機能に不可欠なBSCL2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、BSCL2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Seipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSeipin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、BSCL2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Seipin HDRプラスミド（h）および Seipin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはBSCL2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のBSCL2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。