Sec15A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405860

概要

EXOC6はSec15Aをコードしており、Sec15Aは8量体からなるエキソシスト複合体の中核構成要素です。エキソシスト複合体は、SNARE依存的な膜融合に先立って、分泌小胞を形質膜へ空間的に制御された形で係留（テザリング）する働きを担います。Sec15AはRABおよびRHOファミリーGTPアーゼのシグナル伝達を極性エキソサイトーシスに結び付け、膜タンパク質の輸送、細胞遊走、細胞質分裂、上皮極性を支えます。小胞輸送や膜リモデリングにおける役割を通じて、EXOC6は細胞間接着や受容体リサイクリングを形成する経路とも関連し、これらは増殖性・浸潤性の細胞表現型でしばしば攪乱されるプロセスです。Sec15Aを含むエキソシストサブユニットの機能異常は、がん関連および神経発生の文脈において、分泌プログラムやシグナル出力の変化と関連することが文献で報告されており、そのためEXOC6は機構解明研究の標的として有用です。

Sec15A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEXOC6遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EXOC6内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EXOC6のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sec15Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sec15Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EXOC6欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sec15Aの機能に不可欠なEXOC6エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EXOC6ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sec15A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSec15A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EXOC6遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sec15A HDRプラスミド（h）および Sec15A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEXOC6ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEXOC6標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。