SEC13 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431017

Panoramica

Sec13 codifica SEC13, un componente essenziale del complesso del rivestimento COPII che guida la selezione del carico e la gemmazione delle vescicole dai siti di uscita del reticolo endoplasmatico, supportando il traffico dal RE all’apparato di Golgi. Oltre alla funzione nella via secretoria, SEC13 partecipa all’architettura del complesso del poro nucleare e contribuisce alla regolazione dell’omeostasi cellulare attraverso il controllo, dipendente dal traffico di membrana, della localizzazione e del turnover delle proteine. L’alterazione del trasporto dipendente da SEC13 può perturbare la proteostasi, la segnalazione di stress e il coordinamento del ciclo cellulare, rendendo Sec13 un nodo utile per studiare vie che intersecano secrezione, dinamica di membrana e scambio nucleo-citoplasma. Nei modelli murini, i modelli di perdita di funzione di Sec13 sono rilevanti per indagare come i processi di traffico e quelli associati ai pori influenzino lo sviluppo e i fenotipi cellulari legati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEC13 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sec13 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sec13 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sec13 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEC13.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sec13 per lo studio della segnalazione di SEC13, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sec13 critici per la funzione di SEC13
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sec13 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEC13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEC13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sec13. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEC13 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEC13 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sec13 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sec13 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.