SEC13 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-431017

概要

Sec13はSEC13をコードしており、COPII被覆複合体の中核構成要素として、小胞体出口部位（ER exit sites）からの貨物選別と小胞出芽を担い、ERからゴルジ体への輸送を支えます。分泌経路での機能に加えて、SEC13は核膜孔複合体の構築にも関与し、膜輸送に依存したタンパク質の局在やターンオーバー制御を通じて、細胞恒常性の調節に寄与します。SEC13依存的な輸送が破綻すると、プロテオスタシス、ストレスシグナル伝達、細胞周期の協調が乱れ得るため、Sec13は分泌、膜動態、核‐細胞質間輸送が交差する経路を研究するうえで有用な結節点となります。マウス系では、Sec13の機能喪失モデルは、輸送や核膜孔関連プロセスが発生や疾患関連の細胞表現型にどのように影響するかを検討するためのモデルとして有用です。

SEC13 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSec13遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sec13内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sec13のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEC13タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEC13シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sec13欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEC13の機能に不可欠なSec13エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sec13ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEC13 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSEC13 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sec13遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEC13 HDRプラスミド（m）および SEC13 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSec13ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSec13標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。