SAP 18 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404214-ACT

SAP18はSAP18をコードしており、DNA結合型リプレッサーをヒストン脱アセチル化およびクロマチンの凝縮へと結び付ける、Sin3A/HDAC転写コリプレッサー複合体の保存性の高い構成要素です。この役割を通じてSAP18は、細胞周期の進行、分化、ストレス応答性転写を制御する遺伝子発現プログラムのエピジェネティックな調節に寄与します。コリプレッサーやHDAC関連ネットワークの異常は、がん生物学全般で観察される転写の破綻状態や、クロマチン制御の異常を伴う疾患において、しばしば関与が示されています。そのためSAP18は、転写抑制ダイナミクス、クロマチン再構築、ならびに細胞アイデンティティの経路レベルでの制御という文脈で一般的に研究されています。

SAP 18 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SAP18の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAP 18 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SAP18 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSAP18転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAP 18の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSAP18遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAP 18依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSAP18発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAP 18経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。