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SAP 155双切口酶质粒(h) | sc-402925-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP 155双切口酶质粒(h2) | sc-402925-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SF3B1 编码 SAP155,它是 U2 snRNP 中 SF3b 亚复合体的关键核心组分,在 pre‑mRNA 剪接过程中帮助界定分支点(branch point)和 3′ 剪接位点。通过参与剪接体的组装以及剪接位点的选择,SAP155 影响转录本同工型的多样性,并将 RNA 加工与细胞周期调控、DNA 损伤应答和蛋白质稳态联系起来。SF3B1 依赖的剪接失调与多种癌症和血液系统恶性肿瘤中广泛的异常外显子使用以及基因表达程序改变有关,也与其他剪接体保真性受损的疾病相关。因此,SF3B1/SAP155 常被用于研究剪接因子扰动如何引发下游信号通路变化以及 RNA‑seq 剪接特征的改变。
SAP 155 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 SF3B1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对SF3B1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏SF3B1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了SF3B1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。