SAP 155 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402925-ACT

SF3B1 codifica a SAP 155, um componente central do subcomplexo SF3b dentro da snRNP U2, que é necessária para o reconhecimento do ponto de ramificação e a remoção precisa de íntrons durante o splicing do pré‑mRNA. Ao ajudar a montar e estabilizar o spliceossomo no sítio de splicing 3′, a SAP 155 influencia programas de splicing alternativo que moldam a diversidade do proteoma e coordenam o processamento de RNA com a regulação transcricional. A perturbação da seleção de sítios de splicing dependente de SF3B1 desorganiza a maturação do RNA e pode alterar a expressão de vias que controlam a progressão do ciclo celular, respostas a danos no DNA e diferenciação. SF3B1 é frequentemente estudado no contexto da biologia do spliceossomo e de erros de splicing associados a doenças, nos quais variantes codificantes recorrentes estão ligadas a um amplo splicing aberrante e à reprogramação do transcriptoma.

SAP 155 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SF3B1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAP 155 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SF3B1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SF3B1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAP 155. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SF3B1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAP 155 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAP 155 em células tumorais com expressão de SF3B1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.