Plasmide CRISPR d'Activation (m) SAMHD1: sc-424985-ACT

Le gène murin *Samhd1* code SAMHD1, une désoxynucléotide triphosphohydrolase (dNTPase) qui régule les réserves intracellulaires de désoxynucléotides afin de maintenir la stabilité du génome lors de la réplication et de la réparation de l’ADN. En modulant la disponibilité des nucléotides, SAMHD1 s’inscrit à l’interface des voies de signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN, des mécanismes liés au stress réplicatif et du contrôle du cycle cellulaire, et peut également influencer la détection innée en façonnant la disponibilité de substrats d’acides nucléiques. Dans les lignées myéloïdes et lymphoïdes, SAMHD1 est étudiée pour ses rôles dans la restriction de la réplication rétrovirale et le contrôle de programmes de signalisation inflammatoires. Une activité dérégulée de SAMHD1 a été associée, dans des modèles expérimentaux, à des phénotypes aberrants liés à l’interféron, à des réponses modifiées au stress génotoxique, ainsi qu’à des processus immunitaires et hématologiques pertinents pour la maladie.

SAMHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Samhd1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAMHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Samhd1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Samhd1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAMHD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Samhd1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAMHD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAMHD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Samhd1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.