Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAMD9: sc-418037-ACT

SAMD9 (sterile alpha motif domain containing 9) code une protéine cytoplasmique impliquée dans la régulation de l’immunité innée et le contrôle de la prolifération cellulaire, à laquelle on attribue des rôles dans la restriction de la réplication virale et la modulation des réponses stimulées par l’interféron. La fonction de SAMD9 s’inscrit à l’interface des programmes de réponse au stress et des voies homéostatiques qui influencent la croissance et la survie cellulaires, ce qui concorde avec son activité proposée de régulateur négatif de la prolifération. Des altérations génétiques de SAMD9 sont associées à des phénotypes héréditaires d’insuffisance médullaire et d’immunodéficience, et sont fréquemment impliquées dans les syndromes myélodysplasiques pédiatriques via des variants germinaux ou acquis. Ces liens font de SAMD9 un locus utile pour étudier le contrôle de la croissance couplé à l’inflammation et les mécanismes d’adaptation somatique dans les cellules hématopoïétiques.

SAMD9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SAMD9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAMD9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SAMD9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SAMD9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAMD9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SAMD9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAMD9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAMD9 dans les cellules tumorales présentant une expression de SAMD9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.