SAMC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-414066

Visão geral

O gene humano SLC25A26 codifica a SAMC (transportador mitocondrial de S-adenosilmetionina), um transportador da membrana interna mitocondrial que importa S-adenosilmetionina para a matriz a fim de sustentar reações de metilação mitocondriais. Ao fornecer SAM para metiltransferases de RNA, proteínas e metabólitos, a SAMC dá suporte à expressão gênica mitocondrial, à homeostase da fosforilação oxidativa e à adaptação metabólica ligada ao estado redox. A interrupção do transporte mitocondrial de SAM perturba a coordenação do metabolismo de um carbono entre o citosol e a mitocôndria e pode alterar o processamento de mtDNA/RNA e a função da cadeia respiratória. Variantes que afetam a atividade de SLC25A26 têm sido associadas a fenótipos de disfunção mitocondrial, tornando este gene relevante para estudos mecanísticos da biologia de doenças mitocondriais e de respostas ao estresse metabólico.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SAMC (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SLC25A26 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SLC25A26, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SLC25A26 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SAMC.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SLC25A26 para a investigação da sinalização de SAMC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SLC25A26 críticos para a função SAMC
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SLC25A26 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SAMC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SAMC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SLC25A26. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SAMC Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SAMC (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SLC25A26 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SLC25A26 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.