Plásmido Doble Nickase (h) Sam 68: sc-401378-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Sam 68 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Sam 68 (h) y el plásmido de doble nickasa Sam 68 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a KHDRBS1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Sam 68 Anticuerpo (H-4): sc-514468
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Sam 68 | sc-401378-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Sam 68 | sc-401378-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KHDRBS1 codifica Sam 68, una proteína de unión a ARN de la familia STAR que acopla la transducción de señales con el metabolismo del ARN mediante la regulación del empalme alternativo, la exportación de ARNm, su estabilidad y la traducción. Sam 68 actúa en el núcleo y en el citoplasma y se modula por fosforilación aguas abajo de vías como las quinasas de la familia Src y MAPK, conectando la señalización por factores de crecimiento con la selección de isoformas de transcritos. A través de su control de programas de procesamiento de ARN, KHDRBS1 influye en la progresión del ciclo celular, la apoptosis y la dinámica del citoesqueleto, y se ha implicado con frecuencia en la proliferación y en fenotipos invasivos en modelos relacionados con el cáncer. La actividad desregulada de Sam 68 también se ha asociado con alteraciones del procesamiento neuronal de ARN y con la expresión génica sensible al estrés, lo que respalda su relevancia en estudios de empalme específico de tejido y de redes reguladoras del ARN.
Sam 68 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus KHDRBS1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de KHDRBS1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de KHDRBS1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con KHDRBS1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.