RXRβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402266-ACT

O receptor X de retinoides beta (RXRB; RXRβ) é um receptor nuclear ativado por ligantes que atua como parceiro transcricional central para múltiplas famílias de receptores, incluindo PPARs, LXRs, FXR, VDR e receptores de hormônio tireoidiano. Ao formar heterodímeros e se ligar a elementos de resposta a retinoides, o RXRβ coordena programas gênicos que controlam o metabolismo de lipídios e glicose, a homeostase do colesterol e dos ácidos biliares, a inflamação e a diferenciação celular. A regulação transcricional dependente de RXRB integra a sinalização por retinoides com redes mais amplas de receptores nucleares que moldam estados metabólicos e imunológicos específicos de cada tecido. A sinalização desregulada de RXRβ tem sido implicada em distúrbios metabólicos e no remodelamento transcricional associado ao câncer, tornando o RXRB um nó útil para estudos mecanísticos focados em vias.

RXRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RXRB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RXRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RXRB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RXRB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RXRβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RXRB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RXRβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RXRβ em células tumorais com expressão de RXRB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.