Plásmido Doble Nickase (h) RUNX2: sc-400183-NIC

RUNX2 codifica el factor de transcripción 2 relacionado con runt (RUNX2), un regulador maestro del compromiso de linaje de los osteoblastos y de la morfogénesis esquelética, que se une a elementos consenso de RUNX para coordinar programas génicos que controlan la producción de matriz extracelular y la mineralización. Integra señales de las vías BMP/TGF-β, Wnt/β-catenina, MAPK y Hedgehog para regular la diferenciación, la progresión del ciclo celular y las redes transcripcionales en progenitores mesenquimales. La actividad de RUNX2 modela la cromatina y coopera con cofactores como CBFB para impulsar la expresión de genes osteogénicos, entre ellos COL1A1, ALPL y BGLAP. La expresión o función desregulada de RUNX2 se ha implicado en trastornos esqueléticos del desarrollo, alteraciones de la homeostasis ósea y funciones dependientes del contexto en la progresión tumoral y la metástasis, a través de efectos sobre programas transcripcionales asociados a la EMT y la remodelación de la matriz.

RUNX2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RUNX2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RUNX2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RUNX2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RUNX2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.