RSAD2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402884-ACT

RSAD2 (viperina) é um efetor antiviral induzido por interferon que se localiza no retículo endoplasmático e em gotículas lipídicas, sendo rapidamente induzido a jusante da sinalização de receptores de reconhecimento de padrões. Participa de vias imunes inatas coordenadas por interferons do tipo I e por NF-κB, moldando as respostas celulares à infeção viral ao modular processos associados à membrana e o imunometabolismo. O RSAD2 tem sido associado à regulação da sinalização inflamatória e da produção de citocinas, e a sua expressão serve como um indicador molecular do envolvimento da via do interferon. A atividade desregulada de RSAD2 e as assinaturas de interferon são frequentemente estudadas no contexto de infeções virais crónicas e de patologia imune associada ao interferon.

RSAD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RSAD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RSAD2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RSAD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RSAD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RSAD2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RSAD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RSAD2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RSAD2 em células tumorais com expressão de RSAD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.