RNF40 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404156
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RNF40 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico RNF40, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RNF40 Anticorpo (1C1): sc-293333
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RNF40 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404156 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
RNF40 codifica uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING finger que forma um heterodímero obrigatório com RNF20 para monoubiquitinar a histona H2B (H2BK120ub), uma modificação chave da cromatina que conecta o alongamento da transcrição ao crosstalk epigenético com a metilação de H3K4 e H3K79. Por meio dessa atividade, RNF40 regula programas de expressão gênica dependentes da RNA polimerase II, a acessibilidade da cromatina e respostas coordenadas a danos no DNA que dependem do remodelamento da cromatina em locais de estresse replicativo ou de quebras de dupla fita. A ubiquitinação de H2B dependente de RNF40 impacta o controle do ciclo celular e redes transcricionais específicas de linhagem, tornando-a relevante para estudos de estabilidade genômica e de transcrição desregulada observada no câncer e em outros distúrbios proliferativos. Alterações na sinalização de RNF40 também têm sido associadas a mudanças em vias inflamatórias e do desenvolvimento por meio do controle dependente do contexto da função de enhancers e promotores.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RNF40 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RNF40 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RNF40, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RNF40 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RNF40.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RNF40 para a investigação da sinalização de RNF40, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RNF40 críticos para a função RNF40
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RNF40 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo RNF40 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RNF40 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RNF40. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo RNF40 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RNF40 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RNF40 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RNF40 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.