Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RNase L Double Nickaseプラスミド (h): sc-403412-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- RNase L Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- RNase Lダブルニカースプラスミド（h）およびRNase Lダブルニカースプラスミド（h2）は、RNASELを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: RNase L 抗体 (E-9): sc-74405
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
RNase L Double Nickaseプラスミド (h) | sc-403412-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNase L Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-403412-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトRNASELはRNase Lをコードしており、RNase Lはインターフェロン誘導性のエンドリボヌクレアーゼである。RNase Lは、自然免疫がウイルス由来および細胞由来の二本鎖RNAを感知する過程でOAS酵素によって産生される2′-5′オリゴアデニル酸（2-5A）によって活性化される。いったん活性化されると、RNase Lは一本鎖RNAを切断して病原体の複製を抑制し、細胞のトランスクリプトームを再編し、さらにRIG-I/MDA5–MAVS経路やその下流のI型インターフェロン応答などの経路を介して抗ウイルスシグナルを増幅する。RNase L活性はRNAの安定性、翻訳制御、ストレス応答にも影響し、細胞増殖やアポトーシスのより広範な制御とも結び付いている。RNASELの遺伝的多型や発現・機能の破綻は、抗ウイルス防御の変化や炎症関連の表現型と関連づけられており、免疫シグナル伝達や疾患感受性の機序を研究するうえでの重要性を裏付けている。
RNase L ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RNASEL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RNASEL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RNASELの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RNASELが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。