Rim3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407285

概要

RIMS3 は Rab3-interacting molecule 3（Rim3）をコードしており、Rim3 はアクティブゾーンにおける神経伝達物質放出装置の構築を担う前シナプス性の足場タンパク質です。Rab3 GTPase や他のシナプス構成要素との相互作用を介して、Rim3 は小胞のドッキング／プライミング、カルシウム誘発性エキソサイトーシス、ならびにシナプス効率の維持に寄与します。RIMS3 に関連する機構は、シナプス伝達と可塑性を制御する神経細胞シグナル伝達経路と交差しており、これらの過程は神経発達および神経精神疾患様の表現型にしばしば関与するとされています。RIMS3 の発現変化や変異は神経系機能障害の文脈で検討されており、シナプス構造の組織化やネットワーク活動の分子決定因子を研究するうえで重要です。

Rim3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRIMS3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RIMS3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RIMS3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rim3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rim3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RIMS3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rim3の機能に不可欠なRIMS3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RIMS3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rim3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRim3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RIMS3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rim3 HDRプラスミド（h）および Rim3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRIMS3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRIMS3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。