Ribosomal Protein S3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402327

概要

RPS3 はリボソームタンパク質 S3 をコードしており、翻訳開始、コドン解読、ならびにリボソーム生合成全体を支える 40S 小サブユニットの中核構成因子です。タンパク質合成における構造的役割にとどまらず、RPS3 は細胞ストレス応答とも関連づけられており、転写制御、アポトーシス、DNA 損傷応答に結びつくシグナル伝達ネットワークに影響を及ぼし得ます。リボソーム機能は増殖とプロテオーム恒常性を制約するため、RPS3 の発現変化やリボソームの不均衡は、がん化に伴う増殖、炎症性シグナル、神経変性に伴うストレスといった文脈でしばしば検討されます。そのため RPS3 の攪乱は、翻訳制御がゲノム維持やプロテオスタシス経路とどのように接続しているかを解析するうえで有用です。

Ribosomal Protein S3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRPS3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RPS3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RPS3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ribosomal Protein S3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ribosomal Protein S3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RPS3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ribosomal Protein S3の機能に不可欠なRPS3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RPS3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ribosomal Protein S3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRibosomal Protein S3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RPS3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ribosomal Protein S3 HDRプラスミド（h）および Ribosomal Protein S3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRPS3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRPS3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。