Ribosomal Protein L13A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403494-ACT

RPL13A codifica a proteína ribossomal L13A, um componente central da subunidade ribossomal grande 60S, necessária para a montagem do ribossomo e para o alongamento eficiente da tradução. Além do seu papel estrutural no ribossomo, a L13A participa de programas de controle translacional ligados ao estresse celular e à sinalização inflamatória, incluindo vias responsivas ao interferon que modulam a tradução seletiva de mRNAs. Alterações na biogênese de ribossomos e a desregulação da síntese proteica são características comuns de estados proliferativos e de adaptação ao estresse, tornando o RPL13A relevante para estudos de controle do crescimento celular e proteostase. Como um gene ribossomal amplamente expresso, o RPL13A também é frequentemente usado como referência em fluxos de trabalho de expressão gênica, e sua regulação pode orientar interpretações sobre remodelamento translacional global.

Ribosomal Protein L13A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPL13A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ribosomal Protein L13A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPL13A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPL13A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ribosomal Protein L13A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPL13A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ribosomal Protein L13A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ribosomal Protein L13A em células tumorais com expressão de RPL13A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.