Riboflavin kinase Double Nickaseプラスミド (h): sc-418359-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Riboflavin kinase Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Riboflavin kinaseダブルニカースプラスミド（h）およびRiboflavin kinaseダブルニカースプラスミド（h2）は、RFKを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Riboflavin kinase 抗体 (E-7): sc-398830
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Riboflavin kinase Double Nickaseプラスミド (h) | sc-418359-NIC | 20 µg | $410.00 |
RFKはリボフラビンキナーゼをコードしており、リボフラビン（ビタミンB2）をリン酸化してフラビンモノヌクレオチド（FMN）を生成する細胞質酵素である。これはフラビン補酵素生合成における最初の不可逆的（コミット）段階にあたる。FMNはその後FADへと変換され、ミトコンドリアの酸化的代謝、脂肪酸β酸化、ならびに細胞の抗酸化防御において中核となる、フラボタンパク質依存的な多様な酸化還元反応を支える。細胞内のFMN/FADの利用可能量を制御することで、RFKはビタミン状態をエネルギー恒常性および活性酸素種（ROS）の制御と結び付ける役割を担う。フラビン代謝の異常は代謝機能障害やミトコンドリア機能不全と関連づけられており、RFKは栄養依存的な酸化還元経路やストレス応答の制御を研究するうえで有用な標的となる。
Riboflavin kinase ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RFK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RFK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RFKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RFKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。