RhoC Plasmide Double Nickase (h): sc-401242-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RhoC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RhoC Double Nickase Plasmid (h) e il RhoC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RHOC. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RhoC Antibody (C-10): sc-393090
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RhoC Plasmide Double Nickase (h) | sc-401242-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RhoC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401242-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RHOC codifica la piccola GTPasi RhoC, un membro della famiglia Rho che funziona da interruttore molecolare, alternando stati legati a GDP e a GTP per regolare il rimodellamento del citoscheletro di actina. La segnalazione di RhoC coordina l’assemblaggio delle fibre da stress, la dinamica delle adesioni focali e la contrattilità cellulare tramite effettori come ROCK e mDia, integrandosi con vie che controllano la polarità e la motilità cellulare. Un’attività alterata di RHOC è stata associata a fenotipi invasivi in molteplici contesti tumorali e a modifiche dell’organizzazione del citoscheletro che influenzano la disseminazione metastatica. RHOC è quindi ampiamente utilizzato come nodo per lo studio delle reti di GTPasi Rho, della meccano-trasduzione e dei programmi di segnalazione legati alla migrazione nelle cellule umane.
RhoC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RHOC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RHOC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RHOC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RHOC interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.