RHBDL6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404212

概要

RHBDF2は、エンドメンブレン（細胞内膜系）に局在し、膜結合性基質の制御されたプロテオリシスに寄与するロンボイドファミリーの膜内セリンプロテアーゼであるRHBDL6をコードしています。RHBDL6の活性は、タンパク質品質管理、細胞内輸送、およびシグナル伝達成分の分解・ターンオーバーと関連づけられており、小胞体関連分解（ERAD）やストレス適応プログラムと統合されて、細胞のプロテオスタシスを形作ります。これらの機構を介してRHBDL6は、EGFRリガンドの利用可能性に結び付く経路や自然免疫の調節を含む、成長因子シグナルおよび炎症性シグナルの出力に影響を与え得ます。ロンボイドプロテアーゼによるプロセシングの破綻は、がん生物学や炎症性疾患モデルにおけるシグナル伝達ネットワークの病的な再構築と関連していることが報告されており、疾患に関連する文脈でのRHBDL6依存的プロテオリシスの検討を支持します。

RHBDL6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRHBDF2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RHBDF2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RHBDF2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RHBDL6タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RHBDL6シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RHBDF2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RHBDL6の機能に不可欠なRHBDF2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RHBDF2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RHBDL6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRHBDL6 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RHBDF2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RHBDL6 HDRプラスミド（h）および RHBDL6 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRHBDF2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRHBDF2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。