RFXAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406793

概要

RFXAP（regulatory factor X associated protein）は、X-boxプロモーター要素に結合してMHCクラスII遺伝子の発現を駆動するRFX転写複合体に必須の補助因子である。この役割を通じてRFXAPは抗原の処理・提示を支え、CIITA依存的な転写プログラムを制御することで適応免疫の活性化の在り方を形成する。RFXAPの機能喪失変異はMHCクラスIIの発現を障害し、免疫監視の低下を特徴とするII型裸リンパ球症候群（bare lymphocyte syndrome type II）と関連する。モデル系では、RFXAPの攪乱がインターフェロン応答経路、免疫細胞分化、ならびに宿主—病原体相互作用を規定する機構に影響を及ぼすことが示されている。

RFXAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRFXAP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RFXAP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RFXAPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RFXAPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RFXAPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RFXAP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RFXAPの機能に不可欠なRFXAPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RFXAPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RFXAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRFXAP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RFXAP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RFXAP HDRプラスミド（h）および RFXAP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRFXAPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRFXAP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。