RFX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406366

概要

RFX4（regulatory factor X 4）はRFXファミリーに属するウィングドヘリックス型の転写因子で、X-box様のプロモーター配列に結合し、細胞種特異的な遺伝子発現プログラムの協調的な制御に関与します。ヒトの生物学においてRFX4は、繊毛形成（ciliogenesis）、脳室の発生、中枢神経系における分化状態などに影響する転写ネットワークの調節を含む神経発生過程と強く関連しています。RFX4活性の変化は、脳のパターニングの破綻や神経発生に関わる表現型と関連づけられており、転写因子駆動の制御回路を研究するうえで有用な切り口となります。RFXタンパク質はクロマチンアクセシビリティを制御する経路や繊毛関連遺伝子モジュールと交差し得るため、RFX4の改変は、神経系譜の制御機構や繊毛シグナル伝達の文脈におけるメカニズム研究において重要です。

RFX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRFX4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RFX4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RFX4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RFX4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RFX4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RFX4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RFX4の機能に不可欠なRFX4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RFX4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RFX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRFX4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RFX4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RFX4 HDRプラスミド（h）および RFX4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRFX4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRFX4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。