RFRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406767

Visão geral

NPVF codifica o precursor do peptídeo relacionado a RFamida, que é processado para gerar neuropeptídeos RFRP, os quais atuam como ligantes endógenos dos receptores NPFF e modulam a sinalização neuroendócrina. Em humanos, o RFRP está implicado no controle hipotalâmico da liberação de gonadotrofinas e no timing do eixo reprodutivo, integrando sinais que influenciam a atividade dos neurônios de GnRH e a secreção hipofisária de LH/FSH. Essa via se conecta a redes neuromodulatórias mais amplas mediadas por GPCR, que afetam a responsividade ao estresse, o balanço energético e a fisiologia reprodutiva ligada ao ciclo circadiano. Alterações na sinalização NPVF/RFRP vêm sendo investigadas no contexto de distúrbios reprodutivos e de estados neuroendócrinos desregulados, dando suporte a estudos mecanísticos sobre processamento peptídico, secreção e sinalização por receptores.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RFRP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene NPVF em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do NPVF, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do NPVF na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RFRP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de NPVF para a investigação da sinalização de RFRP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) NPVF críticos para a função RFRP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos NPVF para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo RFRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RFRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus NPVF. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo RFRP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RFRP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia NPVF para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo NPVF definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.