REP-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404025-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- REP-1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase REP-1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase REP-1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para CHM. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:REP-1 Anticorpo (2F1): sc-23905
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
REP-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404025-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
REP-1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404025-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHM codifica a proteína escolta de Rab 1 (REP-1), uma chaperona citosólica necessária para a prenilação pós-traducional de GTPases Rab pela geranilgeraniltransferase de Rab. Ao apresentar Rabs recém-sintetizadas para geranilgeranilação, a REP-1 favorece o direcionamento às membranas e a função de etapas de tráfego reguladas por Rab, incluindo endocitose, transporte pelo Golgi e vias relacionadas a lisossomos. A interrupção da atividade da REP-1 perturba o transporte vesicular e a homeostase de organelas, processos particularmente críticos em células altamente polarizadas, como o epitélio pigmentar da retina e os fotorreceptores. Variantes de perda de função em CHM estão associadas à coroideremia, tornando CHM um locus-chave para o estudo da biologia da prenilação de Rab e de respostas de estresse celular dependentes de tráfego.
REP-1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CHM em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CHM. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CHM. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CHM interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.