RelB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422643

Panoramica

Relb codifica RelB, un membro della famiglia NF-κB/Rel che agisce prevalentemente nella via non canonica di NF-κB. RelB forma comunemente eterodimeri con p52 (NFKB2) per regolare programmi trascrizionali che controllano la maturazione delle cellule dendritiche, l’organogenesi dei tessuti linfoidi, la sopravvivenza delle cellule B e la segnalazione infiammatoria a valle di recettori quali BAFFR, CD40 e LTβR. Nei sistemi murini, l’attività di RelB collega il dialogo tra immunità innata e adattativa modulando l’espressione di citochine e chemochine e influenzando la presentazione dell’antigene. La disregolazione della segnalazione dipendente da RelB è associata ad attivazione immunitaria aberrante e a uno sviluppo immunitario compromesso, rendendo Relb un bersaglio utile per studi meccanicistici delle reti infiammatorie e della differenziazione delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RelB (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Relb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Relb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Relb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RelB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Relb per lo studio della segnalazione di RelB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Relb critici per la funzione di RelB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Relb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RelB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RelB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Relb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RelB Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RelB (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Relb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Relb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.