RBM35B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408008-ACT

ヒトESRP2（RBM35B）は、pre-mRNAに結合し、上皮性のアイデンティティおよび細胞間接着構造の維持に寄与するオルタナティブスプライシングプログラムを制御する上皮スプライシング制御タンパク質をコードします。細胞骨格ダイナミクス、アドヘレンスジャンクション、上皮間葉転換（EMT）を司る経路におけるスプライスアイソフォームの調節を通じて、ESRP2は分化・遊走・シグナル出力の文脈依存的な制御に関与します。ESRP2の発現量やスプライシング活性の変化は、複数の腫瘍モデルおよび発生モデルで観察される、EMT関連トランスクリプトームの異常やRNAプロセシングの破綻と関連づけられています。RNA結合特異性とアイソフォーム分解能をもつ遺伝子制御を結び付けるノードとして、ESRP2はスプライシング駆動の表現型スイッチングや経路のリワイヤリングを研究するために広く用いられています。

RBM35B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ESRP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RBM35B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ESRP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はESRP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RBM35Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のESRP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRBM35B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびESRP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRBM35B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。