RBM14 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417972-NIC

RBM14（RNA binding motif protein 14）は、多機能なRNA結合タンパク質であり、核内で転写制御とRNAプロセシングを協調させます。スプライソソーム関連の過程に関与し、pre-mRNAスプライシングを転写と連結して、細胞周期制御やストレス応答に関連する遺伝子発現プログラムに影響を与えます。RBM14は核内小体にも局在し、RNA–タンパク質顆粒の形成・構造化および動態に関与することが示唆されており、ゲノム監視やRNA代謝を支えます。RBM14の発現や機能の破綻は、RNAプロセシングの異常を伴う複数のがん関連状況やその他の疾患で観察される、異常スプライシングや転写制御異常と関連づけられています。

RBM14 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RBM14 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RBM14内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RBM14の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RBM14が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。