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RANK慢病毒激活颗粒(h) | sc-400559-LAC | 200 µl | $455.00 |
人类 TNFRSF11A 基因编码 RANK(NF-κB 受体活化因子受体),属于 TNF 受体超家族成员,可转导依赖 RANKL 的信号,从而调控破骨细胞的分化、生存以及骨重塑。RANK 与配体结合后会激活经典与非经典 NF-κB 信号通路,并与 MAPK 和 PI3K/AKT 通路发生交叉协同,以协调控制免疫细胞通讯与组织稳态的转录程序。RANK 通路活性失调与骨代谢周转异常及炎症性微环境等疾病相关,因此常用于研究骨骼生物学与免疫信号之间的联系。作为一种膜受体,RANK 具有明确的配体–受体动力学特征,为开展骨免疫学与 NF-κB 驱动基因网络的机制研究提供了一个易于切入的研究入口。
RANK 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 TNFRSF11A 表达。
RANK 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在TNFRSF11A转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性RANK表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 TNFRSF11A 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。