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RANK双切口酶质粒(m) | sc-423439-NIC | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Tnfrsf11a 编码 RANK(NF-κB 受体活化因子受体),属于 TNF 受体超家族成员,可转导依赖 RANKL 的信号,从而调控破骨细胞分化、骨重塑以及免疫细胞间通讯。配体结合后,RANK 会招募 TRAF 等衔接蛋白,激活 NF-κB、MAPK 和 AP-1 等通路,在髓系谱系中协调细胞存活与分化程序。RANK 信号与骨免疫学密切相关,其失调会影响炎症性骨丢失并改变造血微环境。这些功能使 Tnfrsf11a 成为在小鼠模型中解析免疫信号与骨骼更新耦联机制的关键靶点。
RANK 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Tnfrsf11a 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Tnfrsf11a内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Tnfrsf11a的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Tnfrsf11a基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。