Ran BP-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405001-ACT

RANBP3 codifica a Ran BP-3, uma proteína ligante de RanGTP que atua como cofator da exportação nuclear dependente de CRM1/XPO1, ajudando a regular a distribuição nucleocitoplasmática de proteínas e RNAs. Ao modular gradientes de RanGTP e a montagem do complexo de exportação, Ran BP-3 contribui para o controle de programas de expressão gênica, progressão do ciclo celular e sinalização responsiva ao estresse por meio da dinâmica do transporte nuclear. A desregulação da exportação nuclear é uma característica recorrente do câncer e de outros estados proliferativos ou inflamatórios, tornando RANBP3 um alvo útil para estudos mecanísticos que conectam defeitos de transporte a redes transcricionais alteradas. Em células humanas, a perturbação da expressão de RANBP3 é comumente empregada para investigar a conectividade entre o tráfego nuclear, a regulação transcricional e a proteostase.

Ran BP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RANBP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Ran BP-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RANBP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RANBP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Ran BP-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RANBP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Ran BP-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Ran BP-3 em células tumorais com expressão de RANBP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.