RAMP3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402235-ACT

受容体活性修飾タンパク質3（RAMP3）は、1回膜貫通型のアクセサリータンパク質であり、カルシトニン受容体様受容体やカルシトニン受容体を含む一部のクラスB GPCRとヘテロ二量体を形成することで、リガンド特異性、受容体のトラフィッキング、および下流シグナルのバイアスを規定します。RAMP3は、アドレノメデュリン／CGRPファミリーの受容体複合体を形成・調整することで、cAMP依存性経路に影響を与えるとともに、受容体の内在化とリサイクリングの制御を介して、内皮シグナル伝達、バリア機能、細胞恒常性といったより広範な過程にも関与します。RAMP3の発現変動は、心血管生理に関連するGPCRシグナル伝達プログラムの破綻や、腫瘍関連シグナルネットワークとの関連が報告されており、受容体薬理および細胞状態制御の機構研究における解析ノードとしての有用性を支持します。これらの特性により、ヒトRAMP3は、生理学的に妥当な細胞モデルにおいて受容体複合体の組み立てとシグナル伝達ダイナミクスを解明するための有用な標的となります。

RAMP3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAMP3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RAMP3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAMP3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAMP3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RAMP3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAMP3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRAMP3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAMP3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRAMP3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。