RAGE CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-419040-ACT-2

マウスAgerは、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する多リガンド型のパターン認識受容体である終末糖化産物受容体（RAGE）をコードしており、AGEs、S100タンパク質、HMGB1、ならびにアミロイド関連リガンドに結合して細胞ストレスシグナル伝達を増幅する。RAGEの活性化は、NF-κB依存性転写の促進、MAPKおよびJAK/STAT経路の動員、活性酸素種（ROS）の産生、そして持続的な炎症関連遺伝子発現を引き起こし、内皮細胞の活性化、白血球の動員、組織リモデリングに影響し得る。マウス系では、Ager/RAGEの生物学は、リガンドの蓄積と慢性的な自然免疫シグナルが交差する代謝性炎症、血管機能障害、神経炎症、線維化関連プロセスなどの文脈でしばしば研究される。マウス細胞やモデルにおけるAgerの遺伝子編集は、リガンド特異的シグナルの機序解析、トール様受容体との受容体クロストーク、ならびに免疫・バリア組織に関連する下流の転写プログラムの解明を可能にする。

RAGE CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Agerの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RAGE CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Ager 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAger転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RAGEの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAger遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRAGE依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAger発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRAGE経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。