RADX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409991-ACT

ヒトのCXorf57はRADXをコードしており、RADXは一本鎖DNAに結合する因子として、複製フォークの安定性を調節し、複製ストレスに対する細胞応答を統合的に制御する。RADXは停止したフォークにおいてRAD51活性と拮抗し、異常な組換えを抑制することで、S期およびDNA損傷条件下でのゲノム完全性の維持に寄与する。DNA複製、相同組換えの制御、チェックポイントシグナル伝達における役割を通じて、RADXはフォーク保護の破綻に起因する染色体不安定性や変異プロセスの研究に関連する。RADX機能の破綻（調節異常）は、複製ダイナミクスやDNA修復経路の選択に変化をもたらすことが示されており、ゲノム維持機構を解析するための有用な標的（ノード）となる。

RADX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CXorf57の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RADX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CXorf57 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCXorf57転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RADXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCXorf57遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRADX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCXorf57発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRADX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。