Radical Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422659

概要

Rfng は、ゴルジ体に局在する β1,3-N-アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼである Radical Fringe をコードしており、Notch 受容体の EGF 様リピート上の O-フコース残基を修飾することで、リガンド依存的な Notch シグナル伝達の強度を微調整します。Radical Fringe は、状況依存的に Delta-like と Jagged/Serrate との相互作用を強め分けることを通じて、発生過程および成体の幹細胞／前駆細胞コンパートメントにおける細胞運命決定、境界形成、組織パターニングの制御に寄与します。Fringe による糖鎖付加の変化は Notch 経路の出力を変化させ、増殖や分化を制御する下流の転写プログラムに影響を与え得ます。Notch シグナルの破綻は多様な疾患関連プロセスに関与することから、Rfng はマウスの細胞および in vivo モデルにおいて Notch 駆動性フェノタイプを解析するための有用な結節点となります。

Radical Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRfng遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rfng内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rfngのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Radical Fringeタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Radical Fringeシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rfng欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Radical Fringeの機能に不可欠なRfngエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rfngゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Radical Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRadical Fringe CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rfng遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Radical Fringe HDRプラスミド（m）および Radical Fringe HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRfngホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRfng標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。