Rac 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422573-ACT

Rac1 codifica a Rac1, uma pequena GTPase da família Rho que alterna entre os estados ligados a GDP e a GTP para coordenar a remodelação do citoesqueleto de actina, a formação de lamelipódios e a polaridade celular. Em células de camundongo, a RAC1 integra sinais de receptores tirosina-quinase, integrinas e receptores de quimiocinas para regular vias que envolvem PAK, PI3K/AKT, MAPK e a nucleação de actina dependente de WAVE/ARP2/3. Esses processos influenciam a dinâmica de adesão, o tráfego vesicular e a sinalização por espécies reativas de oxigênio por meio de complexos de NADPH oxidase. A atividade desregulada de RAC1 tem sido associada a fenótipos alterados de migração e invasão, sinalização aberrante do desenvolvimento e biologia tumoral, tornando-a um nó-chave em estudos mecanísticos de controle do citoesqueleto e de transdução de sinal.

Rac 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Rac1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rac 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Rac1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Rac1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rac 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Rac1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rac 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rac 1 em células tumorais com expressão de Rac1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.