Rab11-FIP5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407779-ACT

RAB11FIP5 codifica a Rab11-FIP5, uma proteína interatora da família Rab11 que atua como efetor no tráfego de endossomos de reciclagem dependente de Rab11. Ela coordena processos de triagem de vesículas e reciclagem de membrana que influenciam a renovação de receptores, a endocitose e o transporte polarizado, moldando assim as respostas de sinalização na membrana plasmática. Por meio de suas funções na dinâmica endossomal e na reciclagem de cargas, Rab11-FIP5 contribui para a regulação da migração celular, da adesão e da organização do citoesqueleto. Vias de reciclagem desreguladas envolvendo efetores de Rab11 têm sido associadas a sinalização alterada e a fenótipos invasivos observados em múltiplos modelos relevantes para doenças, o que sustenta sua utilidade em estudos de mecanismos dependentes de tráfego.

Rab11-FIP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB11FIP5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab11-FIP5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB11FIP5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB11FIP5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab11-FIP5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB11FIP5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab11-FIP5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab11-FIP5 em células tumorais com expressão de RAB11FIP5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.