Rab 8A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404285-ACT

RAB8Aは小型GTPアーゼであるRab8Aをコードしており、ゴルジ体以降の膜輸送を制御する中心的な調節因子です。Rab8Aは、極性をもったエキソサイトーシス、小胞の出芽、係留（テザリング）を協調させ、カーゴを細胞膜および一次繊毛へ届ける過程を統括します。Rab8AはGEFやエフェクターと協調してリサイクリングエンドソームの動態、繊毛形成、細胞骨格の組織化を制御し、その結果として細胞極性や指向性移動に影響を与えます。これらの役割を通じてRAB8Aは、繊毛病（ciliopathy）の生物学や発生シグナル伝達に関連する経路に関与し、その制御異常は、がんに関連した文脈において分泌プログラムの変化や浸潤性の細胞挙動と結び付けられています。Rab8A依存的な輸送は神経細胞での輸送やオートファジー関連の膜リモデリングとも連関しており、多様な組織における機構研究に有用です。

Rab 8A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB8Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 8A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB8A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB8A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 8Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB8A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 8A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB8A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 8A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。