Rab 6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417258-ACT

RAB6A codifica a pequena GTPase Rab6, um regulador central do tráfego de membranas no aparelho de Golgi e ao longo de rotas de transporte retrógrado para o retículo endoplasmático. Ao alternar entre os estados ligados a GTP e a GDP, a Rab6 coordena o ancoramento de vesículas, a triagem de carga e o transporte dependente de microtúbulos por meio de interações com efetores envolvidos na manutenção do Golgi e na dinâmica da via secretora. A atividade de RAB6A influencia a organização de organelos, a secreção de proteínas e o tráfego endossomal, processos frequentemente remodelados no câncer e na neurodegeneração. Alterações no transporte dependente de Rab6 também foram associadas à exploração do tráfego do hospedeiro por patógenos e a respostas de estresse celular que afetam a proteostase.

Rab 6A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB6A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 6A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB6A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB6A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 6A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB6A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 6A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 6A em células tumorais com expressão de RAB6A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.