Rab 3A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402633-ACT

RAB3Aは、小型GTPアーゼであるRab 3Aをコードしており、Rab 3Aはシナプス小胞に関連するCa²⁺依存性エキソサイトーシスの調節因子として、シナプス前終末における小胞のドッキング、プライミング、膜融合を協調的に制御します。Rab 3AはGDP結合型とGTP結合型の間を循環しながら、RabエフェクターのネットワークやSNARE関連機構と連携して、神経伝達物質放出と活動依存的な小胞輸送を制御します。これらの過程により、RAB3Aは神経細胞シグナル伝達、シナプス可塑性、ならびに神経内分泌における調節性分泌経路と関連づけられます。小胞輸送やシナプス放出ダイナミクスの破綻は、神経発達疾患や神経変性疾患の機序とも関係するため、RAB3Aはシナプス前機能を研究するうえでの標的として有用です。

Rab 3A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB3Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 3A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB3A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB3A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 3Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB3A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 3A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB3A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 3A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。