Rab 38 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404742-ACT

RAB38 codifica a Rab38, uma pequena GTPase da família Rab que regula o tráfego vesicular e a biogênese de organelas, com funções destacadas no transporte de endossomos para lisossomos e na maturação de organelas relacionadas a lisossomos. A Rab38 coordena a triagem de cargas e a dinâmica de membranas por meio de interações com complexos de ancoragem e efetores, influenciando a entrega de proteínas a melanossomos e a outros compartimentos secretórios especializados. Alterações no tráfego dependente de RAB38 podem modificar a formação de grânulos de pigmento, a função lisossomal e fenótipos de secreção, associando essa via à homeostase celular em células pigmentares e a programas secretórios relacionados ao sistema imune. Como um nó em redes de transporte intracelular, a Rab38 é relevante para estudos mecanísticos de defeitos de tráfego de membranas observados em diversos estados celulares associados a doenças.

Rab 38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RAB38 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rab 38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RAB38 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RAB38, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rab 38. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RAB38 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rab 38 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rab 38 em células tumorais com expressão de RAB38 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.