Rab 2A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403154-ACT

ヒトのRAB2Aは、小型GTPアーゼであるRab 2Aをコードしている。Rab 2Aは、ER（小胞体）からゴルジ体への輸送およびゴルジ体内輸送を担う小胞輸送の中核的な制御因子であり、GDP結合型とGTP結合型の間をサイクルすることで、カーゴの選別、小胞のテザリング（係留）、および融合反応を協調的に制御する。Rab 2Aは分泌経路の恒常性を支え、ゴルジ体の完全性や膜動態など、タンパク質の処理と送達に影響するオルガネラの構築にも寄与する。膜輸送におけるこの役割を通じて、RAB2Aはプロテオスタシス、受容体のターンオーバー、ならびに細胞の増殖・生存に関連するストレス応答を制御する経路とも交差する。RAB2A関連ネットワークを含むRab GTPアーゼのシグナル伝達や輸送プログラムの破綻は、腫瘍化シグナル、神経生物学、病原体—宿主相互作用の文脈で頻繁に研究されており、小胞輸送能が疾患に関連する表現型を規定し得ることが示唆されている。

Rab 2A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB2Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 2A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB2A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB2A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 2Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB2A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 2A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB2A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 2A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。